

細(xì)胞上清測(cè)定LDH問(wèn)題
發(fā)布時(shí)間:2014/6/5 8:32:54 瀏覽次數(shù):10419 [字號(hào):大 中 小] [關(guān)閉此頁(yè) 打印此頁(yè)]
測(cè)的是小鼠肝癌細(xì)胞培養(yǎng)上清的LDH,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)設(shè)了LDH最大釋放孔(在細(xì)胞上清對(duì)比加入2%Triton)和自然釋放孔(細(xì)胞上清對(duì)比加入空培養(yǎng)基)。最大釋放孔LDH測(cè)定值比自然釋放孔還低,不明白原因。
tritonX100是一種表面活性劑。具有疏水端和親水端,它可以將膜蛋白從細(xì)胞膜上解離下來(lái),從而達(dá)到提取膜蛋白的目的,但是其沒(méi)有維持酶活的作用。過(guò)量的tritonX100反而會(huì)破壞蛋白的表面親水層而破壞蛋白結(jié)構(gòu),降低酶活。Triton X-100可以提高真核細(xì)胞細(xì)胞膜的通透性,但時(shí)常使用含 0.1%-0.5%Triton X-100的PBS或TBS。老師采用的濃度是否過(guò)高,導(dǎo)致酶活力喪失原因。
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