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細(xì)胞前處理

發(fā)布時(shí)間：2014/5/27 15:12:18　瀏覽次數(shù)：8305　[字號：大 中 小]　 [關(guān)閉此頁　打印此頁]

養(yǎng)的是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，用25cm2的培養(yǎng)瓶養(yǎng)的，我們這里沒有超聲破碎儀和研磨器，之前有同學(xué)用反復(fù)凍融后再加裂解液的方法，結(jié)果不是很理想，剛才打電話咨詢咱們技術(shù)工程師他說可以用勻漿器，我們的勻漿器是PRO200  Bio-Gen siries  serial NO.是02-0473，一搬都是裂解組織的，不知道這種可以裂解細(xì)胞嗎？如果可以，基于我們實(shí)驗(yàn)室條件有限，您建議我們怎么做實(shí)驗(yàn)結(jié)果會好些呢？麻煩您把實(shí)驗(yàn)的步驟發(fā)給我好嗎？我們剛剛做實(shí)驗(yàn)，有些東西不夠了解，麻煩您講的詳細(xì)些。還有就是測SOD、CAT、GSH-PX、MDA時(shí)，細(xì)胞處理的過程都一樣嗎， 我還想再咨詢下，如果用這個(gè)勻漿器，細(xì)胞量少會不會貼到勻漿器的轉(zhuǎn)子上，也會影響結(jié)果呢？如果用化學(xué)裂解的方法呢？您建議用哪個(gè)廠家的裂解液呢，25cm2的培養(yǎng)瓶您建議一瓶加多少裂解液呢？

這個(gè)根據(jù)收集細(xì)胞數(shù)量，培養(yǎng)細(xì)胞的前處理：將培養(yǎng)細(xì)胞消化，1000～1500轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，棄上清，留下層細(xì)胞，每管加0.3～0.5ml生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備成106/cm3細(xì)胞懸液，即106/ml，再進(jìn)行破碎。破碎細(xì)胞的方法有三種：①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。③、反復(fù)凍溶3次（第③種方法有時(shí)會影響酶活力）。制備好的細(xì)胞懸液一般不需要離心。細(xì)胞數(shù)量較大可以適當(dāng)加大勻漿介質(zhì)量。至于老師考慮的會黏附到勻漿管上，這樣會有一定量的損失，總體不會干擾測定結(jié)果。裂解液考慮到成分可能干擾反應(yīng)，所以不推薦使用，或者使用相對溫和的裂解液Triton X-100.建議最好采用物理方法破碎細(xì)胞

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