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動(dòng)物組織樣本的前處理

發(fā)布時(shí)間：2014/5/16 13:22:50　瀏覽次數(shù)：50758　[字號(hào)：大 中 小]　 [關(guān)閉此頁　打印此頁]

一、勻漿介質(zhì)的制備:

一般采用pH 7.4, 0.01mol/L Tris-HCl, 1mmol/L EDTA-2Na, 0.01mol/L蔗糖,0.8%氯化鈉溶液或直接用0.86%的生理鹽水作為勻漿介質(zhì)。

二、組織勻漿的制備

1、取組織塊（0.1g～0.2g）最少可到2～5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱重，放入5ml的勻漿管中。

2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)（pH7.4， 0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的氯化鈉溶液）或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。

3、勻漿的方式有多種：手工勻漿，機(jī)器勻漿，超聲粉碎。

① 手工勻漿：左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，制成10%的勻漿液。

② 機(jī)器勻漿：用組織搗碎機(jī)10000～15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成10%組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備（勻漿時(shí)間10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3～5次，在冰水中進(jìn)行），皮膚、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。

③ 超聲粉碎：用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎，也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復(fù)3～5次。

        鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片（直接涂片、染色均可以），顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎，若沒有則可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。

4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分左右,離心10～15分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定.

三、樣本保存:

        動(dòng)物組織樣本暫時(shí)不測(cè)定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如不反復(fù)凍融，-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。

        制備好的勻漿液建議不要凍存,最好當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定,如放置時(shí)間過長(zhǎng)相關(guān)酶活會(huì)有所下降,部分指標(biāo)4℃可存放3～5天(如SOD要存放2～3天,MDA可存放3～5,總蛋白測(cè)定可存5～7天等)

血液樣本的收集與保存

植物組織樣本的前處理